ELISA: dekodiranje, metode

Z razvojem sorodnih znanosti, kot sta genetika, molekularna biologija, kemija in rast tehničnega napredka, se lahko sodobna medicina pohvali z inovativnimi metodami za diagnosticiranje različnih človeških bolezni. Odlikuje jih visoka natančnost rezultatov in varnost delovanja. Eden od teh načinov za ugotavljanje zdravstvenih težav je encimski imunski test. V zadnjem desetletju je pridobil široko priljubljenost in si je pridobil ugled kot zelo učinkovita, zanesljiva in varna metoda za odkrivanje bolezni, še preden se pojavijo zunanji simptomi. Jasno bomo razložili, kakšna je ta vrsta diagnoze, kakšno je načelo njenega delovanja, upoštevajte prednosti, jo usmerite v stroške take analize.

Reakcija organizma na patogeno floro

Da bi razumeli, kako laboratorijski tehniki zaradi encimskega imunskega testa diagnosticirajo različne bolezni, je treba razumeti fiziološki proces, ki se pojavi v telesu med okužbo. Ko patogen vstopi v krvni obtok, človeški imunski sistem kaže zaščitno reakcijo v obliki sproščanja določenih snovi - protiteles. Vežejo se na celico in analizirajo, ali je del telesa ali vključena od zunaj. Če imunski sistem ugotovili, da je celica tujec, potem se količina protiteles začne povečevati, da bi preprečili patogeni mikroorganizem.

Protitelesa so različnih vrst, imajo svoje značilnosti. Nekatere snovi se pojavijo neposredno v obdobju okužbe, druge pa ostanejo skozi življenje v človeškem telesu in zahvaljujoč jim razvijejo močno odpornost na določeno bolezen. Strukture beljakovin so razdeljene na take vrste: A, D, E, M, G. V medicini se protitelesa imenujejo imunoglobulini. Zato je običajno, da so lastnosti teh snovi označene z latinskimi črkami Ig.

Imunoanaliza analiza (ELISA) Temelji na podatkih iz medicinskega znanja. Z uporabo posebnih antigenov v laboratoriju lahko ugotovite prisotnost ali odsotnost določenih protiteles v biološkem materialu. Glede na rezultate te analize lahko zdravnik postavi diagnozo in ugotovi ne le prisotnost patologije, ampak tudi trajanje njegovega izvora, da bi ugotovil stopnjo nevarnosti za bolnika. V encimskem imunskem testu je prisotnost protiteles skupin M in G pogosteje proučevana.

Kaj je ELISA?

V bistvu encimski imunski test ni inovacija sodobne družbe. Izumili so jo v osemdesetih letih. Za takšne študije pa je bila potrebna draga oprema. Zato je bila ta metoda uporabljena samo v posebej opremljenih znanstvenih laboratorijih: uporabljali so jo za tipkanje celic in tkiv. Vendar se takrat v diagnostični medicini ni veliko uporabljalo, zato je bilo tehnično težko in zelo drago uporabljati. Samo z razvojem tehnologije in izumom biopolimernih materialov se je ELISA izboljšala. Po tem je metoda postala priljubljena in pridobila zaupanje v medicinske kroge.

Kot je navedeno zgoraj, ta metoda vključuje odkrivanje v biomaterialu - krvi, amnionski tekočini, steklovini ali cerebrospinalni tekočini - določenih skupinah imunoglobulinov.

Obstajajo študije brez uporabe antigena na površinskem in encimsko vezanega imunskega testa, ki vključuje izvedbo reakcije v posebnih vdolbinicah. Slednja metoda ima večjo občutljivost in zanesljivost, zato se analizirajo v medicinskih laboratorijih za odkrivanje človeških bolezni.

Fazna imunska preiskava

Glede na nameravano bolezen, komplet za encimski imunski test uporablja potreben antigen, ki se med kemično reakcijo v prisotnosti okužbe poveže s patogeno floro. Ta proces se imenuje izvajanje imunskega odziva.

Nato, da bi vizualno določili rezultat študije, izvedite encimsko fazo ELISA. Vključuje obarvanje materiala s posebnimi reagenti. V tej študiji se uporabljajo encimi, kot so alkalna fosfataza, peroksidaza in avidin. Odvisno od nastale barve v procesu izvajanja kemičnih reakcij in določiti rezultat encimskega imunskega testa.

Kaj je kolorimetrija?

Analizo encimske diagnoze izvajamo z metodo, ki ima ime "kolorimetrija". Dejstvo je, da ne le barva materiala daje informacije o okužbi, temveč tudi gostoto barve, ki je posledica kemičnih reakcij. Ta indikator določa koncentracijo patogena. Če uporabljamo ročno metodo diagnostike na staromoden način, potem izdelamo poseben umeritveni graf za določitev prikazanih indikatorjev.

V sodobnih laboratorijih se ročna metoda danes le redko uporablja. Za analizo ELISA se uporablja posebna naprava - kolorimeter, v katerem so ročno nastavljeni samo parametri študije, nato pa naprava samodejno opravi vse delo, vključno z načrtovanjem.

Metode ELISA

Obstajajo neposredne in posredne metode encimskega imunskega testa. Prva vrsta traja manj časa, saj ima le tri stopnje izvajanja. Prvič, antigeni dodanega materiala dodamo specifična protitelesa, ki jih damo v posebne vdolbinice. Nato odstranite odvečno količino in izvedite encimsko fazo analize, s čimer dobite rezultat.

Posredna metoda se uporablja veliko pogosteje, saj ima večjo občutljivost v primerjavi z neposredno diagnostično metodo. Pri njegovem izvajanju se uporablja dvojna raziskava. Prvič, antigen je povezan z neoznačenim protitelesom in nato z označenim. Ta postopek traja več časa, vendar je rezultat najbolj natančen.

Kompleti reagentov

Kompleti za imunoanalizo izdelujejo različni proizvajalci, v različnih nivojih opreme. V Rusiji je priznana družba Unija biomedicinskih. Ta proizvajalec proizvaja nabor reagentov za študijo po metodi ELISA skoraj vseh pogostih okužb v naših zemljepisnih širinah, ki jih je mogoče analizirati na ta način. Poleg samih reagentov kompleti vključujejo dodatne materiale, ki zagotavljajo varnost, udobje in hitrost analize. Poleg tega so kemične snovi pobarvane v različnih barvah, kar zmanjšuje verjetnost napak pri izbiri reagentnega laboratorija.

Kemijsko-biološki kompleti se razlikujejo glede na razpoložljivost, kar neposredno vpliva na porazdelitev in razpoložljivost encimskega imunskega testa za populacijo.

Prednosti diagnostične metode

Nedvomno ima encimski imunski preskus številne prednosti v primerjavi z drugimi diagnostičnimi metodami:

1. Z njegovo pomočjo lahko določimo tudi majhno prisotnost patogenih organizmov, kar kaže na visoko občutljivost testa.
2. Možnost odkrivanja bolezni v najzgodnejših fazah, kar bistveno poveča možnost uspešnega okrevanja.
3. Preprostost in udobje jemanja biološkega materiala. Ta analiza se izvaja tako v zasebnih laboratorijih kot v javnosti. Če je potrebno, lahko medicinska sestra vzame material od pacienta doma.
4. Za analizo je potrebna zelo majhna količina biomateriala.
5. Hitri rezultati. Sodobna medicinska oprema vam omogoča, da opravite analizo v enem dnevu.
6. Sposobnost odkrivanja skritih asimptomatskih oblik okužbe.
7. Študija dostopnosti.
8. Če je potrebno, je mogoče z uporabo te metode opraviti množične raziskave.
9. Obstaja možnost sledenja poteku bolezni in učinkovitosti predpisanega zdravljenja, saj je možno ELISA analizo opraviti večkrat popolnoma varno za bolnika.
10. Avtomatizacija faz analize, ki odpravlja človeški faktor in povečuje zanesljivost rezultatov.
11. Reagenti za izvajanje IFA so shranjeni dovolj dolgo - približno eno leto.
12. Analiza je možna z nihanjem temperature okolice.

Imunoglobulini skupine M

Antitijela skupine M proizvaja imunski sistem takoj po odkritju tujega antigena. Če je bil encimski imunski preskus zaključen z detekcijo takšnih snovi v biomaterialu, to kaže na akutno fazo bolezni, primarno okužbo. Imunoglobulini skupine M so lahko v telesu do enega meseca, odvisno od vrste okužbe. Nato se njihovo število zmanjša do popolnega izumrtja.

Skupina G imunoglobulini

Zamenjana z imunoglobulinsko skupino M se pojavi beljakovinska struktura oblike G. Te snovi proizvajajo močno, v večini primerov, doživljenjsko odpornost na bolezen. Določanje beljakovinske strukture IgG v materialu, ki se preučuje, kaže, da se je organizem že prej srečal s patogenom in da ima zaščitno reakcijo proti ponovni okužbi.

Indikacije za diagnozo

Za določanje različnih nalezljivih bolezni, hormonskih stanj in alergijskih testov se uporablja encimski imunski test. Namreč:

• določanje ravni ščitničnih hormonov;
• kazalniki reproduktivnega hormonskega panela;
• oncomarkers;
• zaznavajo povzročitelje infekcij, kot so citomegalovirus, hepatitis, toksoplazma, rdečka, ošpice, tuberkuloza, klamidija, sifilis, mikoplazma, ureplazma, candida, giardia in celo HIV;
• so diagnosticirani avtoimunske bolezni. Vključno s pogosto uporabljenimi za študijo ščitničnih hormonov encimsko vezanega imunskega testa: TSH, TG, T3 in T4.

Poleg diagnostičnih namenov se v medicinskih raziskovalnih dejavnostih uporablja metoda encimskega imunskega testa.

Kako se odvzame material?

V večini primerov je za analizo priporočljivo vzorčenje venske krvi. Po obdelavi in ​​pripravi materiala za študijo se izvede imunoanaliza. krvni serum ali plazme.

Proučevanje hormonske plošče zahteva posebno pozornost, saj je v tem primeru zelo pomembno upoštevati značilnosti vnosa materiala. Na primer, za diagnozo najbolj ženskih hormonov reproduktivnega sistema je treba v nekaterih dneh menstrualnega ciklusa jemati vensko kri. Na številne druge hormone vplivajo zunanji dejavniki: sezonskost, čas dneva, psihološko stanje bolnika in še veliko več. Brez upoštevanja specifičnih dejavnikov lahko dobite napačen rezultat, ki bo povzročil poslabšanje bolezni ali nepravilno zdravljenje.

V nekaterih, bolj pogosto zapletenih primerih je za analizo morda potrebna cerebrospinalna tekočina, steklasta ali amnijska tekočina nosečnice. Postopki za zbiranje teh bioloških materialov nosijo določeno tveganje, imajo kontraindikacije in obnovitveno obdobje. Zato ga je treba izvajati le na podlagi pričanja zdravnika in pod njegovim strokovnim nadzorom enakovrednega imunskega testa. Dekodiranje v tem primeru zahteva posebno medicinsko znanje in lahko traja nekaj časa.

Priprava na analizo

Enzimski imunski preskus je treba izvesti, pri čemer je treba upoštevati vsa priporočila, saj zunanji dejavniki vplivajo na rezultate študije. Na primer, pomembno je, da zjutraj vzamete vensko kri na prazen želodec (do 11 ur). 2 tedna pred načrtovanim zbiranjem materiala, morate prenehati jemati katerokoli zdravilo, zlasti hormonsko. Nekaj ​​dni pred študijo se je treba vzdržati uporabe alkohola in maščobnih živil, kakor tudi odpraviti fizične napore, izkušnje in stres.

Rezultati dekodiranja

Dekodiranje rezultatov encimskega imunskega testa zahteva posebno poznavanje posebnosti proteinskih struktur (protiteles), ki so bile opisane zgoraj (IgG in IgM). V skladu s temi podatki se analizirajo raziskovalni kazalniki. Tabela opisuje možnosti, ki jih je mogoče dobiti med analizo:

Če analiziramo predstavljeno tabelo, lahko sklepamo, da bodo v večini primerov potrebne dodatne študije za potrditev diagnoze. Ne more dati dokončnega odgovora le na encimski imunski test. Norma v tem primeru nima jasnih meja: zaznani proteini skupine G kažejo samo, da je bil organizem predhodno okužen z določenim patogenom. Toda isti rezultat lahko kaže na prisotnost akutne faze - pomembno je, da primerjamo številne dejavnike in kazalnike, da bi postavili pravilno diagnozo.

Dejavniki tveganja

ELISA je 90% natančna. Kljub temu obstajajo dejavniki tveganja, ki vplivajo na izkrivljanje diagnostičnega rezultata: nepravilno delovanje opreme, nepravilno zbiranje materiala, njegovo shranjevanje in prevoz ter zanemarjanje drugih zunanjih dejavnikov.

Diagnosticiranje po transfuziji krvi, hemolizi, kirurškem posegu, biopsiji ali punkciji biološkega materiala ni priporočljivo - to lahko vpliva tudi na rezultate indikatorjev.

Stroški analize

Stroški diagnostične študije imajo velik razpon in so odvisni od vrste analize in antigena, ki ga je treba določiti, saj se na podlagi teh faktorjev izračunajo stroški kompletov reagentov in določi kompleksnost analize. Toda v večini primerov je ELISA na voljo številnim bolnikom. Njegova cena se giblje od 300 p. do 2000 str.

ELISA je cenovno dostopna, hitra in zelo učinkovita metoda za diagnosticiranje obsežnega seznama bolezni. Toda le kvalificirani zdravnik ima pravico obravnavati razlago rezultatov in diagnoze.